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细胞培养经验谈
双击自动滚屏 发布者:shdobio 发布时间: 阅读:

细胞培养经验谈

1、如何选用培养基
  培养养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养,各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基(SFM)。在开始进行新的细胞培养时,可以参考下表所列的条件: 
细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 
293 成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM, 10% 热灭活马血清 
3T6 成纤维细胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% 胎牛血清 
A549 上皮细胞 人 肺癌 F-12K, 10%胎牛血清 
A9 成纤维细胞 小鼠 结缔组织 DMEM, 10%胎牛血清 
AtT-20 上皮细胞 小鼠 垂体肿瘤 F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清 
BALB/3T3 成纤维细胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% 胎牛血清 
BHK-21 成纤维细胞 仓鼠 肾 GMEM, 10% 胎牛血清 或MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
BHL-100 上皮细胞 人 乳房 McCoy'5A, 10% 胎牛血清 
BT 成纤维细胞 牛 鼻甲骨细胞 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA 
Caco-2 上皮细胞 人 结肠腺癌 MEM, 20% 胎牛血清 和NEAA 
Chang 上皮细胞 人 肝脏 BME, 10% 小牛血清 
CHO-K1 上皮细胞 仓鼠 卵巢 F-12, 10% 胎牛血清 
Clone 9 上皮细胞 大鼠 肝脏 F-12K, 10% 胎牛血清 
Clone M-3 上皮细胞 小鼠 黑素瘤 F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清 
COS-1 成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% 胎牛血清 
COS-3 成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% 胎牛血清 
COS-7 成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% 胎牛血清 
CRFK 上皮细胞 猫 肾 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
CV-1 成纤维细胞 猴 肾 MEM, 10% 胎牛血清 
D-17 上皮细胞 狗 骨肉瘤 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
Daudi 成淋巴细胞 人 淋巴瘤病人血液 RPMI-1640, 10% 胎牛血清 
GH1 上皮细胞 大鼠 垂体肿瘤 F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清 
GH3 上皮细胞 大鼠 垂体肿瘤 F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清 
H9 成淋巴细胞 人 T细胞淋巴瘤 RPMI-1640, 20% 胎牛血清 
HaK 上皮细胞 仓鼠 肾 BME, 10% 小牛血清 
HCT-15 上皮细胞 人 结肠直肠腺癌 RPMI-1640, 10% 胎牛血清 
HeLa 上皮细胞 人 子宫颈癌 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA (in suspension, S-MEM) 
HEp-2 上皮细胞 人 喉 癌 MEM, 10% 胎牛血清 
HL-60 成淋巴细胞 人 早幼粒细胞白血病 RPMI-1640, 20% 胎牛血清 
HT-1080 上皮细胞 人 纤维肉瘤 MEM, 10% HI 胎牛血清 和NEAA 
HT-29 上皮细胞 人 结肠腺癌 McCoy's 5A, 10% 胎牛血清 
HUVEC 内皮细胞 人 脐带 F-12K, 10% 胎牛血清 和 肝素盐 100 ug/ ml 
I-10 上皮细胞 小鼠 睾丸癌 F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清 
IM-9 成淋巴细胞 人 骨髓瘤病人骨髓 RPMI-1640, 10% 胎牛血清 
JEG-2 上皮细胞 人 绒毛膜癌 MEM, 10% 胎牛血清 
Jensen 成纤维细胞 大鼠 肉瘤 McCoy's 5A, 5% 胎牛血清 
Jurkat 成淋巴细胞 人 淋巴瘤 RPMI-1640, 10% 胎牛血清 
K-562 成淋巴细胞 人 骨髓性的白血病 RPMI-1640, 10% 胎牛血清 
KB 上皮细胞 人 口腔癌 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
KG-1 骨髓白细胞 人 红白血病病人骨髓 IMDM, 20% 胎牛血清 
L2 上皮细胞 大鼠 肺 F-12K, 10%胎牛血清 
L6 大鼠 骨骼肌成肌细胞 DMEM, 10% 胎牛血清 
LLC-WRC 256 上皮细胞 大鼠 癌 Medium 199, 5% 马血清 
McCoy 成纤维细胞 小鼠 未知 MEM, 10% 胎牛血清 
MCF7 上皮细胞 人 乳腺癌 MEM, 10% 胎牛血清 NEAA, 10ug/ml 胰岛素 
WEHI-3b 类巨噬细胞 小鼠 骨髓单核细胞白血病 DMEM, 10% 胎牛血清 
WI-38 上皮细胞 人 胚胎肺 BME, 10% 胎牛血清 
WISH 上皮细胞 人 羊膜 BME, 10% 胎牛血清 
WS1 人 胚胎皮肤 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
XC 上皮细胞 大鼠 肉瘤 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
Y-1 上皮细胞 小鼠 肾上腺瘤 F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清 


2、为什么要热灭活血清
   加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。 


3、L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗? 
   L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,但是确切的降解率一直没有最终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。

 
4、GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?
 
   GlutaMAX-I二肽是L-谷氨酰胺的衍生物,将其不稳定的α-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。 

5、为什么培养基中可以省去加酚红? 
   酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。

 
6、如何用台盼兰计数活细胞? 
   用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升,在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,因而染成蓝色的细胞是死细胞。

 
7、如何消除组织培养的污染?
   当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。


8、培养基中丙酮酸钠的作用是什么? 
   丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。

 
9、为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀? 
   GIBICO的胎牛血清 没有预老化,储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。 

10、Hank’s 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用,不需要CO2培养箱。原因是什么?Hank’s 平衡盐溶液(HBS)和Earle’s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别? 
   HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,碳酸氢钠的含量在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡,以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中,溶液会变碱,Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织,需要用Eagles液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织,用Hanks液就可以了。

 
11、Qualified和 Certified 胎牛血清有什么差别?
   Certified 胎牛血清包括了Qualified 胎牛血清执行的所有的标准检验程序,而且除了这些标准检测,Certified胎牛血清还有如下一些附加的检测:
End-Point Determination of Endotoxin Content
噬菌体检验
生物化学检测 
激素的检测
血红蛋白检测

 
 

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